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放射免疫分析的含義和工作原理

更新時(shí)間:2025-12-06      點(diǎn)擊次數(shù):201

 

一、放射免疫是什么意思?

 

放射免疫是 “放射性核素標(biāo)記" 與 “免疫反應(yīng)" 兩項(xiàng)技術(shù)的結(jié)合。

 

免疫:指利用抗原和抗體之間高度特異性的結(jié)合反應(yīng)。就像一把鑰匙只能開(kāi)一把鎖,一種抗體通常只識(shí)別并結(jié)合一種特定的抗原(待測(cè)物)。

放射:指使用放射性同位素(如您提到的碘-125)作為“標(biāo)記"或“標(biāo)簽",為免疫反應(yīng)提供一個(gè)可被高靈敏度探測(cè)的信號(hào)。

 

簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō),放射免疫分析就是用放射性物質(zhì)當(dāng)“發(fā)光記號(hào)筆",來(lái)追蹤和測(cè)量免疫反應(yīng)中極微量的目標(biāo)物質(zhì)。

伽馬放射免疫計(jì)數(shù)器500.jpg


 

它的兩大主要分支是:

 

1. 放射免疫分析:標(biāo)記的是抗原。

2. 免疫放射分析:標(biāo)記的是抗體。

   (后文會(huì)詳細(xì)解釋區(qū)別)

 

二、核心工作原理:競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合分析

 

以經(jīng)典的放射免疫分析為例,其核心思想是 “競(jìng)爭(zhēng)"。

 

想象一個(gè)場(chǎng)景:

 

固定數(shù)量的“座位":反應(yīng)體系中加入有限數(shù)量的、針對(duì)待測(cè)物的特異性抗體(固定在試管壁或顆粒上)。

兩種“競(jìng)爭(zhēng)者":

已知量的“帶標(biāo)簽的競(jìng)爭(zhēng)者":用放射性同位素(如I-125)標(biāo)記的、與待測(cè)物結(jié)構(gòu)相同的標(biāo)記抗原。它是有放射性的。

未知量的“無(wú)標(biāo)簽的競(jìng)爭(zhēng)者":樣本中待測(cè)的真實(shí)抗原(如病人血液中的某種激素)。它是沒(méi)有放射性的。

競(jìng)爭(zhēng)規(guī)則:標(biāo)記抗原和待測(cè)抗原會(huì)競(jìng)爭(zhēng)性地去結(jié)合那數(shù)量有限的抗體“座位"。

 

關(guān)鍵邏輯(倒推關(guān)系):

 

如果樣本中待測(cè)抗原濃度很高,它會(huì)“搶走"大部分抗體座位。

結(jié)果:能與抗體結(jié)合的標(biāo)記抗原就變少。

最終,通過(guò)測(cè)量與抗體結(jié)合的放射性強(qiáng)度,就能反向推算出樣本中待測(cè)抗原的濃度。

測(cè)量到的放射性越強(qiáng),說(shuō)明結(jié)合的標(biāo)記抗原越多,也就意味著樣本中的待測(cè)抗原越少。反之亦然。

 

這個(gè)過(guò)程可以用下圖直觀展示:

 

       

112.jpg


 

三、關(guān)鍵步驟與設(shè)備角色

 

1. 孵育與競(jìng)爭(zhēng):將樣本、標(biāo)記抗原、抗體混合,在一定條件下孵育,讓競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)充分進(jìn)行。

2. 分離:這是最關(guān)鍵的一步。反應(yīng)結(jié)束后,需要將與抗體結(jié)合的部分和未結(jié)合(游離)的部分分離開(kāi)來(lái)。常用的分離方法有:離心(使用包被抗體的磁性顆粒或第二抗體)、吸附、過(guò)濾等。

3. 測(cè)量:將結(jié)合部分(或游離部分,通常測(cè)結(jié)合部分)放入伽馬免疫計(jì)數(shù)器中。

儀器會(huì)探測(cè)標(biāo)記同位素(如I-125)發(fā)出的伽馬射線,并給出計(jì)數(shù)率。

放射性強(qiáng)度與樣本中待測(cè)抗原的濃度存在反比關(guān)系。

4. 定量:通過(guò)同時(shí)測(cè)量一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,可以繪制出一條標(biāo)準(zhǔn)曲線(以放射性強(qiáng)度為Y軸,標(biāo)準(zhǔn)品濃度為X軸)。將未知樣本測(cè)得的放射性強(qiáng)度代入曲線,即可計(jì)算出其精確濃度。

 

四、RIA 與 IRMA 的區(qū)別

 

RIA:如上所述,標(biāo)記抗原,采用競(jìng)爭(zhēng)法。適用于檢測(cè)小分子抗原(如激素、藥物)。

IRMA:標(biāo)記抗體,采用非競(jìng)爭(zhēng)法(或稱(chēng)“夾心法")。

使用過(guò)量的標(biāo)記抗體,直接“捕捉"樣本中的抗原,形成“抗體-抗原-標(biāo)記抗體"復(fù)合物。

測(cè)量到的放射性強(qiáng)度與待測(cè)抗原濃度成正比(抗原越多,形成的復(fù)合物越多,放射性越強(qiáng))。

靈敏度通常更高,適用于大分子蛋白質(zhì)。

 

總結(jié)與意義

 

放射免疫分析的原理精髓在于:

利用放射性核素提供超高靈敏度的探測(cè)信號(hào),利用抗原-抗體的特異性結(jié)合實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)識(shí)別,再通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)或夾心的設(shè)計(jì),將難以測(cè)量的生物分子濃度,轉(zhuǎn)化為可以精確計(jì)數(shù)的放射性物理信號(hào)。

20世紀(jì)中后期,它是測(cè)量血液、體液中極微量物質(zhì)(如激素、腫瘤標(biāo)志物、病毒抗原)的金標(biāo)準(zhǔn),靈敏度可達(dá)皮克級(jí)。您提到的伽馬免疫計(jì)數(shù)器,正是為此而生的核心測(cè)量設(shè)備。

雖然如今許多檢測(cè)已被更安全、快速的非放射性免疫方法(如化學(xué)發(fā)光、熒光免疫)所取代,但放射免疫的原理是現(xiàn)代所有免疫定量分析技術(shù)的基石,其設(shè)計(jì)思想依然深刻影響著體外診斷領(lǐng)域。


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